利来电游

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                7分文章要做很多东西?很难吗?学学别人吧!
                栏目:最新研究动态 发布时间:2020-04-20
                氨气(NH3)是一种已知的①有害气体存在于阴霾中,会形成130吨大白菜130吨土豆 沈阳内蒙古运蔬菜驰援武汉二次有机气溶胶,进入呼吸道对健康①产生不利影响......

                   NH3是一种已知的有害气体,会对我们的呼吸系统造成伤害。NH3存在于阴霾中,会形成二次有机气溶胶,进入Ψ呼吸道对健康产生不利影响。但是,尚未确定由NH3引起的气管的具体损害机制。ceRNA调控机制及其多种作用已在许多病理〖机制中提出。本文作者以肉鸡为材料,研究了NH3吸入后ceRNA在鸡气管中的功∩能作用。本文于2019年11月发表在Journal of Hazardous Materials(IF:7.65)上。
                本文思路如下图所示:

                本文研究结美墨加三国签署美墨加协定修订版果如下:
                1、气管细胞超微结构观察
                   如图1,透射电镜☆下正常对照(C组)气管美国核心CPI十年来首次环比下滑,清洁产品价格大幅上涨细胞形态正常,细胞ζ膜边缘清晰完整,线粒体ω大小正常,无异常〗结构变化。 然而,NH3暴露组(H组)具有许多细胞坏死的典型特征,包ω 括集中的纤毛细胞核,核仁缺乏,线粒体肿胀,空泡化,甚至细胞质破裂,伴随细胞膜破裂。以上证实,NH 3可以诱导气管细胞坏死。

                                                              图1 用透射电镜(TEM)观察暴露于NH3的气管

                2、lncRNAs和miRNAs的聚类分析△
                   RNA测序中」鉴定出79个差」异表达的lncRNA(DE-lncRNA)(图2A)和21个差异表达的miRNA(DE-miRNA)(图2C)。此外,作者发现lncRNA-107053293和miR-148a-3p(图2 B,红色▆方框所示)在调控NH3代谢过程中可能是重要的功能原件,因而以此为目标进行下一步分析。

                                                              图2 lncRNAs和miRNAs的聚类分析

                3、lncRNA-107053293和miR-148a-3p对NH3暴露后气管中□FAF1表达的影响
                   图3 A是作者筛选№的5条显著差异表达的lncRNA进行qRT-PCR验证,其中lncRNA-107053293差异最显著。此外,qRT-PCR显示miR-148a-3p在H组中显著上◆调表达(图3B)。miR-148a-3p的靶基因FAF1(已知的抑制细胞凋亡)在H组中显著下调表达(图3C和D)。所以作者猜测气管在暴露于NH3引发的凋亡可能与lncRNA-107053293和miR-148a-3p有关。

                                                        图3 lncRNA-107053293、miR-148a-3p、FAF1在气管中的表达水平

                4、NH3暴露后气管内坏死相关基因的表达
                   基于FAF1的表征,作者检测了RIPK1,RIPK3,MLKL,FADD和caspase 8的表达,这些蛋白均与细胞坏死※有关。正如预期,暴露于NH3后,气管中RIPK1,RIPK3,MLKL和FADD表达都升高了。并且在mRNA水平上,FADD,RIPK1和RIPK3表达升高超过2倍,而MLKL增加1.5倍,caspase 8减少约60%(图4A)。类似的,上述蛋白的蛋白水平表达趋势得出一致的结论(图4B)。结合前人的研究,caspase 8下调细胞〖坏死会增加,因此,作者得出结论,NH3暴露后可能通过激活caspase 8引发气管坏死。

                                                               图4 检测】导致气管组织坏死的基因

                5、lncRNA-107053293/miR-148a-3p/FAF1相互作用网络
                   亚细胞定位显示lncRNA-107053293主要在细胞质中表达(图5A),之后构建了lncRNA-107053293/miR-148a-3p/FAF1组件,如图5B,双荧光素酶实验显示三者之间确实存在结合位点可相95后姑娘开12米长货车跑长途:为了生活也为了爱情互作用(图5C和D)。
                   此外,过表达lncRNA-107053293,miR-148a-3p的表达显著下调,但FAF1表达水平显著升高(图5E和F)。相反,miR-148a-3p过表达lncRNA-107053293和FAF1的丰度都下降了,而FAF1蛋白水平下降的更为明显(图5G)。以上表明, lncRNA-107053293可通■过螯合miR-148a-3p来调节FAF1的表达。

                                                     图5 lncRNA-107053293/miR-148a-3p/FAF1相互作用网络

                6、氯化铵致LMH(鸡肝细胞癌细胞系)坏死
                   作者摸索了不同浓度氯化铵用于NH3暴露的≡最佳浓度,如图6A, 50 mM氯化铵杀死了一半的细胞,所以作者最终选择5 mM浓度的氯化铵,此时细▲胞存活率大于95%。此外,流式结果显示对照组中只有0.559%的细胞坏死,而当暴露于氯化铵时,有25.3%的细胞坏死(图6B)。

                                                                 图6 CCK-8和流式疫情之下 美国天主教堂提供“不停车忏悔”服务检测的结果
                   为了验证上述结果,作者检测了气管细胞中坏死相关基因的mRNA和蛋白质表达,如图7A和B所示,氯化铵模拟的NH3暴露后,组织中FADD和MLKL表达增幅最大,其次是RIPK1和RIPK3。以上结果表明氯化铵可导致细胞黎巴嫩累计新冠肺炎确诊病例609例坏死。

                                                                   图7坏死相关基因的表达
                   总之,本文进一步阐明了氨致鸡气管□损伤的生物学机制,为氨毒理学研究奠定了更深层次的理论基础。此外,本文的实验手段并不〇复杂,但发了7分的杂志,值得借鉴。
                参考文献:
                   Wang Wei., Shi Qunxiang., Wang Shengchen., Zhang Hongfu., Xu Shiwen., (2019). Ammonia regulates chicken tracheal cell necroptosis via the LncRNA-107053293/MiR-148a-3p/FAF1 axis., J. Hazard. Mater., undefined, 121626.